松材线虫病致病机理研究进展

松材线虫病又称松材线虫萎蔫病、松树萎蔫病、松树枯萎病，是我国目前最为严重的自然灾害之一。我国1982年发现松材线虫病，之后病害在热带和亚热带地域迅速蔓延造成严重危害，近年来又逐步入侵暖温带，突破年均温10℃线扩张至辽宁等中温带和秦岭等高海拔地域，造成大面积松林枯死。2017年秋季普查，全国累计新增疫点77个县级行政区，发生面积127.54万亩，病死树118.95万株。辽宁大连等多地发现疫情，重点生态区三峡库区疫情依然严重，库区腹地秦巴山区多处出现新疫情，重点名胜地生态安全告急，疫情已逼近黄山和庐山核心风景区，造成林业经济与生态的巨大损失。

松材线虫病是由松材线虫、寄主植物、媒介昆虫、伴生真菌和细菌、经济物流活动及环境因子等多种因素交织作用形成的复杂病害系统。由于其病害的复杂性，关于松材线虫的致病机理至今尚无定论，因此，也制约了松材线虫病有效防控技术的产出。

1 病原

1.1 松材线虫

松材线虫Bursaphelenchus xylophilus (Steiner & Buhrer) Nickle属于线形动物门，滑刃目Aphelenchida、滑刃亚目Aphelenchina、滑刃总科Aphelenchoidoidea、滑刃科Aphelenchoididae、伞滑刃属Bursaphelenchus，是我国危害较大的外来入侵物种之一。它是通过松墨天牛Monochamus alternatus等媒介昆虫传播于松树体内，从而引发松树病害。被松材线虫感染后的松树，针叶黄褐色或红褐色，萎蔫下垂，树脂分泌停止，树干可观察到天牛侵入孔或产卵痕迹，病树整株干枯死亡，最终腐烂。

早在1971年，Kiyohara and Tokushige通过接种实验证明了松材线虫的致病性，同时也证明只有将线虫接种到木质部，松树才会死亡。1972年，Mamiya and Kiyohara进一步的接种实验证明了松材线虫的致病性。随后，许多研究者如Dropkin and Foudin(1979)、Mamiya(1983)和Fukuda (1997)等的接种实验证明了松材线虫能引起松树萎蔫。Bolla and Jordan(1982)经制霉菌素、链霉素和青霉素消毒后得到的无菌线虫接种，实验证实无菌线虫的致病性并未丧失。Kuroda(1991)用松材线虫接种黑松，发现1周后黑松的水分输导发生障碍，但松树体内的微生物和健康松树类似，直至接种5周后，蓝变菌Ceratosystis spp.开始出现，细菌才开始增多，因此认为接种松材线虫能单独引起松树枯萎，与其它微生物无关。Zhu等(2012)在无菌条件下，用从卵阶段就开始无菌化处理获得的无菌线虫接种无菌组培苗实验，结果表明无菌松材线虫及带菌松材线虫接种均能使赤松和湿地松无菌苗发生萎蔫，无菌化处理并未使松材线虫丧失致病性，而松材线虫体表细菌单独接种未能使无菌苗发病。由此，许多学者认为松材线虫是导致松树发病的唯一病原或直接原因。

1.2 伴生微生物

1.2.1 伴生细菌

早期的研究发现，在线虫数量快速增长之前，感染松材线虫的病木生理和组织病理学已经发生变化，因此推测可能其他因素参与了该病的病理学过程。Oku等(1980)等推测松材线虫以外的因素参与病害发生，Oku等(1981)提出松材线虫使松树萎蔫可能是松材线虫携带的细菌代谢产物在发挥作用；Tada等(1981)肯定了从松材线虫上分离到的细菌具有产生毒素的能力；Kusunoki(1987)经电镜观察感病组织时，发现受到破坏的树脂道和薄壁组织细胞间有大量细菌存在，细胞壁酶解类型与细菌引起的病害相似。Kawazu等(1990)研究认为松材线虫病与线虫伴生微生物有关，并于1996-1999年对此做了一系列的研究，从松材线虫体表分离到3种细菌，分别是蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus、枯草芽孢杆菌B.subtilis和巨大芽孢杆菌B. megaterium，研究发现将细菌和无菌松材线虫混合接种，或用未经无菌化处理的松材线虫接种时，均能使松苗发病。而在同样条件下，单独用细菌或经灭菌处理的无菌松材线虫分别接种赤松实生苗时，均不发病。因此认为该病真正致病是松材线虫和携带的伴生细菌(Kawazu et al., 1996a; 1996b; 1999)。此后，国内一些学者赵博光等(2000，2004，2005，2006)、郭道森(2001)、谢立群等(2004)、谈家金等(2001)、洪英娣等(2003)、王慧利等(2004)、蒋继宏等(2005)、池树友(2008)等、汤坚等(2008)、Han等(2010)、Zhu等(2012)、Vicente等(2012)、徐华潮等(2013)等进行了大量的相关研究，这些研究认为该松材线虫病是由松材线虫和伴生细菌共同引起的复合侵染病害，或松材线虫携带伴生细菌在松材线虫致病过程中发挥重要的作用，松材线虫的无菌化处理会导致其致病性减弱，甚至完全丧失其致病性。

从将近20年前的刘晓庆偷税案到如今范冰冰“阴阳合同”我们不难意识到：对税法规制的真正完善不是一蹴而就的事情。相反，我们更应该与时俱进，把其视作一个长期的动态调整。同时，只有时间与实践才能真正检验出相关税法规制改善合理与否。国家税法部门对税法进行不断完善，公民也能真正走入对高收入者以及对每一个纳税人的监督的大门，社会中的每一份不可或缺的力量的真正凝聚起来。如此，我国立法水平将更高，也将更有利于社会的和谐稳定。

然而，关于上述松材线虫携带细菌致病的观点也存在争议，张建平等(2004)和巨云为等(2008)的研究发现松材线虫携带大量伴生微生物。另外，洪英娣等(2002)、Cdvander and Whvander(2006)、谈家金等(2008)等研究认为松材线虫虫株间携带细菌种类和数量差异较大。林丽等(2017)研究认为无菌和带菌松材线虫均对赤松具有致病性，松材线虫是赤松萎蔫的直接原因，伴生细菌并非赤松萎蔫的必须因子。另外，杨宝君(2002)，认为这些细菌分布非常广泛，可在植物体内、土壤中或媒介昆虫体内，并不是仅存在于松材线虫体内的特异细菌。也就是说松树体内原来已有这些细菌存在，松材线虫并非是起传播细菌的作用。如果细菌确实起作用的话，也是松材线虫进入松树体后才起的作用。叶建仁(2012)认为携带细菌种类和数量相似的松材线虫其致病性可能相同，相反不同地区、不同寄主体上致病力相同的虫株，它们所携带的细菌种类和数量可能是不同的。因此，关于松材线虫携带的细菌在松材线虫致病过程中如何影响或发挥致病作用的，还需要进一步研究证实。

1.2.2 伴生真菌

关于松材线虫伴生真菌，Basham(1970)证明Ceratocystis ips、C.minor、C.montia和C.pilifera单独接种时均可使火炬松死亡。Bolla等(1984)也证明用C. ips接种松苗时,松苗也可萎蔫枯死。伴生真菌在提供食物营养的同时，还会产生某些化学物质促进松材线虫的繁殖，松材线虫在灰葡萄孢Botrytis cinerea培养基上繁殖特别迅速，Matsumor等(1989)从灰葡萄孢中提取出类似激素的化学物质3-辛醇和1-辛烯-3-醇，对松材线虫具有引诱、促进蜕皮和繁殖作用。同时，伴生真菌也可以通过松材线虫及其传播媒介在天牛羽化阶段、迁飞取食过程中与松材线虫同时进入寄主植物体内，实现真菌生存领域的扩展和种群的扩张，二者形成互惠关系(Noritoshi et al., 2002; Yakaoka et al., 2004)。另外，不同地域病木和松材线虫体上的真菌存在种类差别，不同种类的伴生真菌对松材线虫种群数量具有不同的影响(Kobayashi et al., 1974a,1974b)，松材线虫取食长喙壳属Ceratostomella sp.、镰刀菌属Fusarium sp.等真菌时的种群繁殖率明显高于食用灰葡萄孢和盘多毛孢Pestalotia sp.等真菌时的繁殖率(曾永三和冯志新, 1996)。伴生真菌的种类也可以决定天牛从病木中羽化时所携带线虫的数量(Noritoshi et al., 1996)，天牛蛹室周围的优势菌为蓝变菌时，天牛携带的松材线虫数量显著增加(Noritoshi et al., 2002)，通过改变蛹室周围真菌群落种类可以改变松墨天牛羽化所携带的松材线虫数量(Maehara et al., 2005，2006)。这些伴生真菌与松材线虫和媒介昆虫互作的过程中可能存在某种物质对松材线虫的繁殖和龄期的转变及传播有调控或诱导作用，但是如何影响或发挥致病作用还需进一步研究。目前，更多的学者认为松材线虫伴生真菌主要在松材线虫病的后期阶段松树细胞死亡后为松材线虫提供食物，维持松材线虫种群繁衍保存下来和引入新地区提供可能。

太湖流域因长期超采深层承压水已形成我国南方最大的地下水水位降落漏斗群，地面沉降及其所造成的环境灾害已十分严重，降低了堤坝、闸站等防洪排涝工程标准，防洪能力明显降低。长期以来的围湖垦殖和联圩并圩，致使湖泊等水面积减少，流域湿地退化，生物多样性和生态稳定性下降。

2 致病机理

2.1 致病过程

关于松材线虫致病机理存在酶学说、毒素学说和空洞化学说三种观点。酶学说主要基于许多学者在研究过程中发现从松材线虫分泌液和虫体浆的抽提液中能够检测到纤维素酶的存在(Kojima et al.，1994；蒋丽雅等，1995；严东辉等，1997)，以及用细胞壁降解酶处理松苗后表现出与松材线虫病相同的症状(Odani et al.，1985；汪来发等，2005)。该学说认为松材线虫分泌纤维素酶等细胞壁相关的酶能分解细胞壁的纤维素，并且破坏松树薄壁细胞的细胞壁和细胞膜，阻碍松树水分运输，从而导致松树枯萎。

毒素学说基于在松材线虫不存在的部位，受感染的松树细胞也发生病变，接种松材线虫的松树上能够检测、分离到健康松树上没有的有毒物质(曹越等，2001)而提出。该学说认为病原物产生或寄主的代谢紊乱而产生的某种有毒物质与发病有关，其中有毒物质可能是松材线虫的伴生细菌产生，如苯乙酸(Kawazu et al., 1996a)、螯铁蛋白(Le et al., 2011)等，也有可能由松材线虫入侵诱导寄主自身产生，如苯甲酸、邻苯二酚、苯乙酸、2-甲氧基肉桂酸、2-羟基香芹鞣酮等(Oku, 1980, 1988, 1990；曹越等, 2001；王敏敏等，2006)。

空洞化学说基于松树组织病理学特征认为松树木质部管胞的空穴化是导致松树枯萎致死的主要原因。该学说认为，松材线虫入侵松树后，诱导松树体内单萜和倍半萜的含量急剧增加，这类物质容易汽化且具有强烈的挥发性和疏水性，渗入松树管胞后，在管胞内形成空洞，导致水分运输受阻，最终诱导寄主缺水死亡(Myers, 1986; Kuroda, 1988， 1991， 2002; 杨宝君, 2002)。

上述学说从松材线虫致病的生理生化的层次上阐释了松材线虫的致病机理，但从分子水平上深入揭示松材线虫的致病机理，还需要关注致病过程中相关基因的功能及作用机制。

2.2 松材线虫致病的相关基因研究

Shinya等(2013a, 2013b)认为松材线虫致病功能因子主要包括抗性相关蛋白、迁移相关蛋白、干扰功能蛋白，其中抗性相关蛋白是松材线虫顺利完成入侵定殖的关键因素，主要包括过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化物氧化还原酶、谷胱甘肽S-转移酶；迁移相关蛋白是使线虫顺利迁移和躲避松树的过敏性反应相关的酶，主要包括β-1, 3-内切葡聚糖酶、β-1, 4-内切葡聚糖酶、果胶酸裂解酶、类细胞壁松弛蛋白、类毒液过敏原蛋白(VAP)等；干扰功能蛋白作为分子模拟蛋白干扰植物防御反应，主要包括类甜蛋白、蛋白酶抑制剂等。目前关于松材线虫病致病基因功能研究进展，主要包括以下几个方面相关研究：

2.2.1 细胞壁降解相关基因

细胞壁是所有植物病原物的主要障碍，植物寄生线虫必须产生能降解植物细胞壁相关的酶，才能完成其入侵寄生过程。研究发现，松材线虫分泌液及其虫体的抽提液中存在纤维素酶、糖基水解酶(Glycosyl Hydrolase Family)、果胶裂解酶(Pectate Lyases)以及扩张蛋白酶等细胞壁降解酶(Kojima et al., 1994；蒋丽雅等, 1995；严东辉等, 1997)。松材线虫纤维素酶(endo-β-1,4-glucanase)是松材线虫降解植物细胞壁的关键酶(Smant et al., 1998；Zhao et al., 2005)，该酶具有纤维素活性和半纤维素酶活性(Kikuchi et al., 2004; Shibuya & Kikuchi, 2008)。松材线虫接种寄主松树后，通过食道腺上皮细胞和口针分泌纤维素酶，作用于植物细胞壁纤维素-半纤维素复合物，从而降解细胞壁。用细胞壁降解酶处理接种松树后，松树苗表现出与接种松材线虫相同的出现萎蔫症状(汪来发等，2005)。研究发现，松材线虫入侵松树后，纤维素酶荧光信号与寄主早期症状趋于一致(Zhang et al., 2007)，RNAi沉默松材线虫纤维素酶基因后，松材线虫的表型发生明显变化，在真菌培养基上繁殖率降低，在寄主体内的迁移速率降低，致病力减弱(Cheng et al., 2010; Ma et al., 2011)。该基因也是致病性拟松材线虫特异上调表达的基因(Zhou et al., 2016)。因此，松材线虫纤维素酶可能是重要致病因子之一。

糖基水解蛋白酶基因是松材线虫另一个重要细胞壁降解酶，松材线虫存在多个糖基水解酶基因(Kikuchi et al., 2007)，但与其他细胞壁降解酶相比，松材线虫糖基水解蛋白酶基因可能是通过水平基因转移从真菌中获得的，而其他寄生线虫的糖基水解酶基因来源于细菌(Kikuchi et al., 2004；Jones et al., 2008；Palomares-Rius et al., 2014)。果胶裂解酶和扩张蛋白酶也具有细胞壁降解活性，Kikuchi等(2006)克隆了松材线虫果胶裂解酶基因(Bx-pel-1和Bx-pel-2)，其中Bx-pel-1基因重组蛋白具有多聚半乳糖醛酸活性，松材线虫果胶裂解酶基因在食道腺中特异表达，最后分泌到寄主细胞中，有助于线虫在树体内取食和迁移。Kikuchi等(2009)克隆了松材线虫扩张蛋白酶基因，该基因在松材线虫侧腹腺细胞中特异表达，同时也在致病性拟松材线虫中上调表达(Zhou et al., 2016)，因此该基因在线虫与寄主互作中可能有重要作用。

Futai K. Pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus [J]. Annual Review of Phytopathology, 2013, 51: 61-83.

2.2.2 类毒液过敏原蛋白基因

类毒液过敏原蛋白(Venom Allergen Protein，VAP蛋白)属于富含半胱氨酸分泌蛋白家族，该家族蛋白在植物和动物中分布广泛，该蛋白基因在植物线虫入侵过程中有重要作用。Lin等(2011)克隆得到3条VAP蛋白，该3条VAP蛋白属于同一个基因家族。林世峰等(2013)通过原核表达制备了该蛋白多克隆抗体。松材线虫类毒液过敏原蛋白(Bx-vap-1)属于食道腺分泌蛋白，与松材线虫致病性紧密相关(Kang et al., 2012)，通过RNAi沉默vap基因后，松材线虫在寄主体内的迁移率和致病力降低，表明松材线虫VAP蛋白在寄主迁移过程中可能有重要作用。另外，研究发现松材线虫VAP蛋白体外重组表达产物和松材线虫接种后均能引起马尾松α-蒎烯合成酶基因表达上调，同时诱导寄主植物体α-蒎烯大量积累，接种VAP蛋白后，寄主松树细胞质壁分离，细胞核降解，接种点附近部位细胞死亡(Li et al., 2016)。因此，推测松材线虫vap基因可能具有激发寄主防御反应作用，诱导寄主体内萜烯类次级代谢产物大量积累，但其激发作用机制还需进一步研究。

2.2.3 解毒作用相关基因

Kojima K,Kamuyo A, Masumori M, et al. Cellulase activities of pine-wood nematode isolates with different virulences [J]. Journal of the Japanese Forestry Society, 1994, 76 (3): 258-262.

对有害物质的解毒作用(detoxification)是所有生物适应环境胁迫的重要生理过程，为了应对松树次生代谢产物的抑制作用，松材线虫必须通过降解作用(detoxification)对该类物质进行代谢转化(Croteau et al., 2000)。松材线虫通过体内一系列解毒蛋白结合、氧化还原作用等降低寄主次生代谢产物对他的抑制，从而保证其取食和迁移等整个病理学过程(Futai, 2013)。Kikuchi等(2011)指出松材线虫解毒作用可能有3个不同阶段：首先通过细胞色素P450氧化还原作用给次生代谢产物加上功能团，使其更适合作为下游反应的底物，随后通过黄素单氧酶(FMO)、糖基转移酶、脂肪酸氧化酶、谷胱甘肽转移酶、细胞色素P450、酸性磷酸酶、环氧化物酶等将有毒代谢物质转化为无毒物质，最后通过ATP结合转运酶等转运蛋白将中间代谢产物转运到线虫体外。因此，在寄生过程中，松材线虫通过多个降解相关蛋白在分泌系统和消化系统中相互作用保护自身免受寄主防御反应的抑制作用(Espada et al., 2016)。

其中，关于细胞色素P450氧化还原酶的功能研究较多，松材线虫宏基因组学研究发现，松材线虫细胞色素P450代谢途径是松材线虫外源物质和毒素代谢的主要途径(Qiu et al., 2012; Yan et al., 2012; Cheng et al., 2013)；Xu等(2015)通过RACE技术克隆了松材线虫细胞色素P450家族中CYP33C9、CYP33C4、CYP33D3基因，RNAi沉默这些基因后，松材线虫活性、迁移率、繁殖率、致病性降低。松材线虫接种5年生马尾松后，其CYP33C9、CYP33C4基因响应寄主α-蒎烯和β-蒎烯积累而大量表达，与寄主萜烯物质代谢存在明显的相关性(王璇等，2017)。因此，在与寄主互作过程中，松材线虫可能通过CYP450基因降低松树萜烯类物质的抑制作用，但作用机制还需进一步研究。谷胱甘肽转移酶是松材线虫有毒代谢产物转化阶段重要解毒蛋白，研究发现，松材线虫接种寄主松树后，谷胱甘肽转移酶基因上调表达(Zhou et al., 2016)，该基因编码蛋白可能与萜烯化合物和过氧化物抗性相关(Espada et al., 2016)。关于松材线虫其他解毒基因相关报道还未见报道，松材线虫不同解毒基因相互作用及作用机制还需要进一步研究。

2.2.4 活性氧代谢相关基因

过氧化物酶基因是松材线虫活性氧代谢的关键基因，其在松材线虫抗氧化活性中有重要作用。研究发现，松材线虫接种后松树后，松材线虫2-cys过氧化物酶基因(2-Cysteine peroxiredoxin(BxPrx))大量表达，该基因蛋白重组子具有抗过氧化氢的抗氧化活性，其编码蛋白在松材线虫不同组织中大量表达，并能分泌出线虫体外作用于活性氧，从而降低其活性(Li et al., 2016)。致病性拟松材线虫和松材线虫中过氧化物酶基因相对表达量高于不具有致病性线虫的表达量(Zhou et al., 2016)，另外，通过RNAi技术沉默松材线虫过氧化物酶基因，其繁殖率和致病性降低(Fu et al., 2014)。H2O2处理后，松材线虫过氧化氢酶(Catalases)基因Bxy-ctl-1 和 Bxy-ctl-2上调表达，这两个基因能提高松材线虫对活性氧的适应性，从而适应寄主高浓度活性氧环境(Vicente et al., 2015)。另外，松材线虫过氧化氢酶在秀丽隐杆线虫中超表达后也表现出类似的结果，秀丽隐杆线虫的抗氧化性增强(Vincent et al., 2014)。因此，松材线虫过氧化物酶基因和过氧化氢酶基因在抗氧化过程中有重要作用。

2.2.5 模拟蛋白基因

线虫模拟作用在其他植物寄生线虫中已有相关报道，植物寄生线虫会分泌模拟因子干扰植物信号通路，调解或破坏植物细胞发育过程。植物寄生线虫产生功能因子模拟CLV信号通路中的CLE肽链，即分泌与植物CLE肽链高同源性的线虫CLE肽链干扰寄主细胞增殖与分化过程，使寄主持续产生巨细胞，不断为寄生线虫提供食物(Haegeman et al., 2012)。

关于松材线虫模拟蛋白的研究，Shinya等(2013)在松材线虫分泌蛋白中检测到有3条特异性蛋白，包括2条类甜蛋白(thaumatin-like proteins, TLPs)、1条类半胱氨酸蛋白酶抑制剂，与线虫类甜蛋白相比，这2条松材线虫类甜蛋白与松树(松属)类甜蛋白同源性更高。类甜蛋白和蛋白酶分别属于PR(病程相关蛋白)-5和PR-6家族蛋白。Hirao(2012， 2014)研究发现，松材线虫接种寄主黑松后，松材线虫体内类甜蛋白酶与黑松的PR-5和PR-6家族基因同时大量表达，这种同时表达为分子模拟提供了时间上的可能性，并且这些蛋白是由寄主-寄生线虫之间共同进化所得。汪菊等(2016)研究发现，松材线虫类甜蛋白Bx-TLP-1基因与西部白松类甜蛋白(TLP-S3: ADB97933.1)最为相似，松材线虫类甜蛋白(Bx-tlp-1)相对于动物源类甜蛋白，其结构与植物源类甜蛋白更为相似。松材线虫接种马尾松后，马尾松类甜蛋白基因(Pm-tlp)与松材线虫类甜蛋白Bx-tlp-1基因相对表达量峰值存在此消彼长的关系。另外，松树α-蒎烯含量与Pm-tlp基因和松材线虫Bx-tlp-1基因相对表达量时间一致，因此，松材线虫Bx-tlp-1基因可能干扰马尾松Pm-tlp基因的表达，进而影响松树萜烯含量及其防御反应(Meng et al., 2017)。因此，松材线虫分子拟态蛋白在松材线虫致病过程中可能具有模拟蛋白功能并发挥了重要作用。

2.3 松材线虫伴生细菌致病机理

关于松材线虫伴生细菌的作用机理，一些科学家认为，伴生细菌能产生大量有毒物质导致寄主松树死亡。研究发现，假单胞杆菌Pseudomonas sp.会与松材线虫相互作用产生致萎毒素(Wang et al., 2014)。松材线虫伴生细菌荧光假单胞杆菌P. fluorescens分泌环二肽以及与鞭毛蛋白相似的肽链，对黑松树苗和细胞悬浮液均有毒性(Guo et al., 2007)；松材线虫携带的蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus能产生苯乙酸，苯乙酸能致松树发病(Kawazu et al., 1996 a, b)；松材线虫携带的Burkholderia arboris会产生绿脓杆菌螯铁蛋白，对赤松苗和愈伤组织都具有毒性(Le et al., 2011)。另外，松材线虫与其荧光假单胞杆菌伴生细菌可能存在互利共生的关系(Zhao et al., 2005)，用该菌产生的鞭毛蛋白处理松树后，松材线虫种群数量也显著增加(Zhang et al., 2012)，表明荧光假单胞杆菌可能促进松材线虫繁殖。另外，一些伴生细菌还可以通过提高碳利用能力，提高松材线虫致病性(Wu et al., 2013)。覃德文等(2014)结合国内外研究松材线虫伴生细菌的致病性机理研究，分析松材线虫伴生细茵的多样性，总结得出松材线虫伴生细菌种类多样，没有明显的专一性，认为毒素在松材线虫伴生细菌的致病机制中起着重要作用。何龙喜等(2016)研究认为嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia NSPmBx03对松材线虫在寄生和非寄生条件下繁殖的影响不同，对松材线虫致病力有一定增强作用。但也有科学家认为，松材线虫伴生细菌致病性大多仅限于体外愈伤组织或者较小树苗(Jones et al.，2008)。另外，松材线虫伴生细菌也会产生对松材线虫有毒性的化合物(Paiva et al., 2013)，因此否定了互利共生的假设。综上所述，松材线虫伴生细菌的作用机理还存在争议，有待进一步详细研究。

3 致病的生态学过程

媒介昆虫从松材线虫寄主松树中羽化脱出时携带大量松材线虫，当携带松材线虫的媒介昆虫在健康树上取食时，线虫进入寄主体内以寄主树脂道的上皮细胞为食开始大量繁殖；松树感染松材线虫后3-4周表现出发病症状，如油性树脂下降和单萜类挥发物的释放，这些挥发物可以进一步吸引媒介昆虫在松树上产卵，此时松材线虫在寄主树脂道大量繁殖和移动，寄主表现出蒸腾作用降低、流脂量降低、针叶变色逐渐至枯死等症状。当寄主枯死等环境条件不适宜时，松材线虫以真菌为食，这些真菌在天牛蛹室中非常丰富，并且影响着松材线虫在天牛蛹室的种群密度和天牛的携带量，这时，松材线虫由繁殖型2龄幼虫(JⅡ)转变为扩散型3龄幼虫(JIII)，并向天牛蛹室周围聚集，在天牛成虫羽化前，JIII蜕皮变为扩散型4龄幼虫(JIV)。在天牛发育为蛹的过程中，产生的脂肪酸乙酯等物质吸引JIII松材线虫向蛹室聚集，羽化期间，产生蛔甙等物质促进松材线虫由JIII转型成为JIV并进入天牛气管等部位，天牛羽化时通过呼吸系统等进入天牛气孔、体表和生殖系统等部位，天牛成虫进行补充营养取食，线虫再次入侵新的寄主植物体内又形成新一轮的侵染，这样松材线虫完成整个自然传播的生物生态学入侵过程。另外，环境气候条件如高温干旱有利于松材线虫病的发生和流行，人类的经济物流活动的高速发展促进松材线虫长距离传播。

4 结语

综上所述，关于松材线虫的病原，许多学者认为松材线虫是导致松树发病的唯一病原或直接原因。还有一些学者认为松材线虫和伴生细菌共同引起的复合侵染病害，或松材线虫携带伴生细菌在松材线虫致病过程中发挥中重要的作用，关于松材线虫携带的细菌在松材线虫病的致病过程中的作用及发挥致病作用的，还需要进一步研究证实。有关松材线虫的致病机理，酶学说、毒素学说和空洞化学说三种学说在从生理生化的层次上阐释了松材线虫的致病机理，分子水平上的研究，仅限于一些致病相关的基因功能研究，主要包括细胞壁降解相关基因、类毒液过敏原蛋白基因、解毒作用相关基因、活性氧代谢相关基因、模拟蛋白基因等，但缺乏结合松材线虫致病过程的系统研究。

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另外，松材线虫病是由松材线虫、寄主植物、媒介昆虫、伴生真菌和细菌、经济物流活动及环境因子等多种因素交织作用形成的复杂的生态学过程。因此，基于致病因子种类多样，致病机理及其病害系统的复杂性，仅仅针对病原和寄主某一水平或某一状态的致病机理研究还远远不够，尤其在分子层面的致病机理，需要加强结合松材线虫致病过程的多基因协同致病的系统研究及多个生物元之间的化学生态学耦合机制等方面的研究。

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妹妹买上新房，结束了租房的历史，上周六搬家，这是她在省城的第4次搬家，我生活在相距200公里的另一座城市，我与妻子提前动身，准备帮忙搬家。

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Pim-1蛋白主要表达于癌细胞胞浆中，少数表达于细胞核中，表现为棕黄色或深棕色的颗粒沉积(图1)。122例癌组织、相对应的癌旁组织及85例正常肝组织中，Pim-1的总阳性表达率分别为88.5%、73.0%、69.4%，差异有统计学意义(χ2=13.2530，P=0.0013)。与癌旁组织及正常肝组织比较，癌组织中Pim-1蛋白的总阳性率显著上升，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)；但癌旁组织和正常肝组织中的总阳性率无统计学差异(P>0.05)。提示Pim-1蛋白在PHC组织中的表达量显著升高，其总阳性率为PHC组织>癌旁组织>正常肝组织。

研究区由于受多期造山事件影响，岩浆活动频繁，总出露面积65%左右。基性、超基性、中—酸性岩浆侵入活动和火山喷发活动都有，成因类型复杂。近年来的研究进一步表明，东昆仑造山带印支晚期是一个重要的成矿期，也是最具找矿潜力的成矿期，与区内已知矿床点成矿期大致相当[3]。

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葡萄酒评价尤其是感官质量评价体系门槛高，具有一定难度，非专业人士很难进行直观的鉴别。世界上有多种葡萄酒评价体系，我国目前使用的国标在评价方法上存在多年，随着时代和社会发展已经不适应目前现实的要求。为了解决消费者购买难题，让消费者轻松判断葡萄酒品质优劣，“中国葡萄酒感官评价体系”应运而生。

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心理学研究表明，认知动机是学习的内部动机，它源于问题发现和解决的需要。好的问题能激发学生的自我认识冲突，驱动学生积极思维，形成强烈的求知欲望。沿着提出问题、解决问题的方向引导学生积极探究，寻找规律，可以有效促进学生进行自我教育。

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观察组患者的6h乳酸清除率为(40.82±12.36)%,对照组患者的6h乳酸清除率为(25.31±9.31)%,观察组患者的6h乳酸清除率明显高于对照组患者(P<0.05)。

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互动直播课堂根据生源的特点，并不硬性规定教学目的、教学计划、授课方式、课程难点、重点，不能根据预设的程序机械化地操作，应根据实际需要自然生成课堂教学。这样的课堂教学，没有非常严格的计划与提前的预设，抛弃程序化、录像化、机械型、重复性的教学。直播教学根据各班的个性特点，开展直播课堂教学，这种教学现场生成、因无预设而具有惟一性与不可重复性。

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（1）通过将多目标因素建立成关系物元的形式，直观地反映冲突，有利于计算机表达和计算，为开发相应的软件提供了理论基础。

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NATO的标准化机构是NATO标准化办公室（NSO），总部设在比利时布鲁塞尔，成立于2014年，其前身是NATO标准化机构（NSA），是合并了军方标准化机构与NATO标准化办公室后形成的，由NATO标准化机构负责人（DNSA）直接领导。

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完全加权关联规则(I1→I2)提升度(all-weighted Association Rule Lift,awARL)的计算如式(10)所示.

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优化课程教学设计使教师从教学主导者变为引导者，协作学习、课内外个性化学习及合作学习有助于学生语言能力的提高。优化的教学设计使教师能科学控制教学进度，完善教学过程，确保高质教学效果。教学过程最优化理论指导下的课程教学设计为英语视听说的教学提供了新思路。

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